झू लोंगचाओ
चूंकि MERS-CoV संक्रामक क्लोन वायरस प्रोटीन फ़ंक्शन और वायरस-होस्ट इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण प्लेटफ़ॉर्म है। वर्तमान अध्ययन में, वेरो सेल अनुकूलित MERS-CoV (MERS-CoV-HKU) के संक्रामक cDNA क्लोन को क्लास II प्रतिबंध साइट BsmBI आधारित सीमलेस क्लोन तकनीक के साथ तैयार किया गया था। इसके जीनोम को 12 सन्निहित टुकड़ों के पैनल में विभाजित किया गया और पीसीआर द्वारा प्रवर्धन के बाद BsmBI के साथ जोड़ा गया। टुकड़ों को आगे दो राउंड क्लोनिंग के साथ एंडोन्यूक्लिअस BsmBI के पाचन द्वारा गठित अनूठे जंक्शनों का उपयोग करके बैक्टीरियल कृत्रिम गुणसूत्रों (BAC) में इकट्ठा किया गया था। जीनोम के अंदर दो BsmBI प्रतिबंध साइटों को मूक उत्परिवर्तन द्वारा हटा दिया गया और icMERS-CoV-HKU के आणविक मार्कर के रूप में सेट किया गया
जंगली प्रकार के HCoV-EMC/2012 स्ट्रेन की तुलना में, संक्रामक क्लोन द्वारा पुनर्प्राप्त MERS-CoV-HKU ने वेरो और Huh7 कोशिकाओं पर उच्च टिटर दिखाए। आनुवंशिक विश्लेषण द्वारा, यह गैर-संरचनात्मक प्रोटीन (nsp2, nsp3, nsp14, और nsp16) और संरचनात्मक प्रोटीन (स्पाइक, ORF5, और N) पर आनुवंशिक संशोधन पाया गया। समानार्थी उत्परिवर्तन nsp2 (A2169C), nsp3 (C6172T, A6954G), nsp14 (C19514T), nsp16 (T21423G), S (A22367G, T24093A) और, N(T29149A) में रखे गए थे। nsp3 (C6172T, A6954G), S (C25217T), और N (A29574T) में गैर-समानार्थी उत्परिवर्तन पाए गए, जो nsp3(T198I, D1702Y), S (S1251F), और N (S192T) में अमीनो एसिड उत्परिवर्तन की ओर ले जाता है। आश्चर्यजनक रूप से, तीन अमीनो एसिड 'SHY' सम्मिलन और चार न्यूक्लियोटाइड 'TTTA' विलोपन क्रमशः S2 और ORF5 क्षेत्र में पाए गए।
पिछले अध्ययन के अनुसार, BatCoV-HKU4 और BatCoV-HKU25 का RBD मानव DPP4 रिसेप्टर को पहचान सकता है लेकिन BatCoV-HKU5 का RBD ऐसा नहीं कर सकता। MERS-CoV और BatCoVs के बीच संबंध को स्पष्ट करने के लिए, MERS-CoV संक्रामक क्लोन और काइमेरिक MERS-CoV संक्रामक क्लोन तैयार किए गए, जिसमें MERS RBD क्षेत्र को BatCoV-HKU4, BatCoV-HKU5 और BatCoV-HKU25 द्वारा प्रतिस्थापित किया गया। पुनः संयोजक MERS-CoV संक्रामक क्लोनों का Vero और Huh7 सेल लाइनों पर इसके प्रतिकृतिकरण का आगे मूल्यांकन किया गया।
हमारे पुनः संयोजक MERS-CoV संक्रामक क्लोन ने कोरोनावायरस अंतर-प्रजाति संचरण और रोगजनन के अध्ययन में अपनी महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है।